植物与虫豸之间互利共生关系中最为特化的例子即是植物-种子寄素性传粉虫豸专性传粉互利共生关系[1-5]。在此类传粉系统中，虫豸为植物传粉同期国产 成人 在线，并在其生息器官内产卵[6]。最经典的模式有榕树-榕小蜂[7-9]和丝兰-丝兰蛾系统[2， 5]。此外，细蛾科(Gracillariidae)头细蛾属(Epicephala)虫豸与大戟科(Euphorbiaceae)算盘子属(Glochidion)，叶下珠属(Phyllanthus)和黑面神属(Breynia)植物也存在访佛的专性传粉互利共生关系[3， 10-12]。

花气息在植物-虫豸专性传粉互利共生体系中具有很是不毛的生态功能，它四肢宿主植物开释的一种化学信号，不错利害地眩惑种特异性传粉者，介导传粉虫豸定位到宿主，促使两边再会，进而寻求各自所需的答谢[13]。小果叶下珠(Phyllanthus microcarpus)为牝牡同株，单性花。在夜晚，由种特异性头细蛾特意为其传粉：最初，头细蛾在雄花上辘集花粉，然后为雌花传粉，之后在授过粉的雌花中产卵。孵化的幼虫仅耗尽一部分种子即可完成发育，剩余的种子可确保宿主大略繁育后代。这么两边之间变成了专性传粉互利共生关系[10]。然则，小果叶下珠花小且神采不秀逸(图 1)，加之头细蛾一般在夜间行为，进而忖度花气息可能四肢一种化学信号，在夜晚来眩惑传粉头细蛾定位到小果叶下珠植株，是守护小果叶下珠与传粉头细蛾之间高度的种特异性所必须的。因此，分析小果叶下珠花气息的化学构成长短常有必要的。

两性异型性在动物界广泛存在，主要指两性间所施展出的互异，包括个体大小、形态以及神采间的不同，随机甚而包括生理、行径和生涯史等方面的互异[14-15]。在被子植物中，牝牡异花植物均由两性花植物进化而来，快要占被子植物的30%[16]。在牝牡异花的虫媒植物中，雌花和雄花产生的气息频繁都是均质的，不具有两性异型性。其主要原因有两点：(1)雌花和雄花均眩惑兼并传粉者，两性间相似的花气息不错确保传粉者捎带花粉到手完成雄花到雌花的种内漂流，成功完成传粉[17-19]；(2)在一般的传粉系统中，传粉只是是一个副产物，传粉者为植物传粉同期，主淌若从雌花和雄花间所寻求疏导的答谢，比如取食花蜜[20]。然则，在大戟科植物-传粉头细蛾育幼传粉系统中发现一种很真谛的阵势，传粉头细蛾在宿主植物上施展出昭彰不同的传粉行径(答谢)：在雄花上积极采粉，然后为雌花传粉并在其内产卵[3， 10-12]。宿主植物为了确保头细蛾在其上完成这两种高度特异且统共不同的传粉行径，雌花和雄花可能会取舍进化出不同的气息。因此，忖度小果叶下珠雌花和雄花的气息之间可能存在互异，即两性异型性。

基于以上假定，本继续利用动态顶空吸附法分别辘集小果叶下珠雌花和雄花气息蒸发物，期骗GC-MS本事分析眩惑传粉头细蛾的特异性化学信号的构成，况兼期骗主要素分析法比拟雌花和雄花的气息之间化学要素的互异性，来初步研讨守护小果叶下珠和传粉头细蛾专性传粉互利共生关系的化学生态机制。

1 材料和措施 1.1 执行材料

2013年3月底至4月初于广西省凭祥市夏石镇梢平林场近邻公路两旁的小果叶下珠植株 (图 1)上分别辘集盛花期的雌花和雄花：雌花500—600朵；雄花800朵。

1.2 措施 1.2.1 花气息辘集

(1) 花气息辘集 遴荐动态顶空吸附法进行花气息辘集[21]。主要使命经过：将辘集好的花装入无味透明的聚氟乙烯辘集袋中(2 L，TeflonFEP，大连德霖气体包装有限公司)，袋两头分别留有进气口和出气口。最初，用空气泵(FAY4002，成都气海机电制造有限公司)将空气通入活性碳管(外径6 mm，长75 mm，Sigma-Aldrich公司，好意思国)内进行净化，之后经由辘集袋进气口干预袋中，促使袋内花朵气息蒸发，终末用空气泵将蒸发的气息经由辘集袋出气口抽出，导入Tenax TA(100 mg /50mg，60/80目，Sigma-Aldrich公司，好意思国)吸附管(外径6 mm，长75 mm)中进行吸附。通气端和出气端空气流量分别用玻璃转子流量器(LZB-4，天津流量姿色有限公司)扫尾，流速均为400 mL/min。王人集安设器件之间均用无味的特氟隆管(PTEE，VICI Jour公司，瑞士)王人集。花气息辘集于18:30—23:30进行，捏续5 h。在采样过程中，用空气四肢对照，与花气息辘集同步进行。辘集已矣后，用锡箔纸包裹吸附管并装入密封袋内，置于超低温冰盒带回执行室。

(2) 花气息洗脱及浓缩 用正己烷(色谱纯，Fisher公司，好意思国)反复洗脱吸附管3次，辘集约0.5 mL洗脱液于2 mL棕色进样瓶中。为进行样品的定量分析，加入 500 ng正二十烷(色谱纯，Sigma-Aldrich公司，好意思国)四肢内标化合物，然后氮吹浓缩至100 μL，终末将样品置于雪柜内(-18 ℃)保存，直至进行仪器分析时取出。

1.2.2 花气息化学分析

遴荐好意思国安捷伦科技公HP6890 (GC)-5973(MS)气-质联用仪进行气息蒸发物的化学分析。

(1) GC要求 色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；进样量2 μL，遴荐分流模式，分流比4 ∶ 1；柱箱要领升温40 ℃ 保捏 5 min，然后以3 ℃/min升温至 150 ℃，终末以10 ℃/min升至200 ℃，保捏5 min；进样口温度250 ℃；载气为高纯He，流速1.0 mL/min。

(2) MS要求 离子轰击源设为扫描功能，扫描限度35—500 amu，电离格式EI；电子能量70 eV；接口温度280 ℃；离子源温度 230 ℃；四级杆温度150 ℃。

(3) 蒸发物的武断 遴荐仪器自带的轨范谱库(NIST 08)检索定性阐述蒸发物的化学要素。期骗峰面积归一化法计较气息各组分的相对百分含量。

1.3 数据统计分析

所零散据均示意为平均值±轨范差。遴荐Graphad Prism 5. 0软件，对雌花和雄花气息开释量利用非配对样本t锤真金不怕火比拟两者之间的互异性；遴荐SPSS17.0软件，对小果叶下珠雌花和雄花气息化学要素进行主要素分析，并利用非参数锤真金不怕火 Kruskal-Wallis test对两者主要素进行互异显耀性锤真金不怕火。图片均遴荐 Graphad Prism 5. 0软件制作完成。

2 成果与分析 2.1 花气息化合物的构成

期骗GC-MS对小果叶下珠花气息要素进行化学分析，共武断出17种化合物(表 1)，其中反-β-罗勒烯在雌花和雄花中含量均最高，分别蒸发20.8 pg 和3.76 pg，各占相对百分含量的26.77%和17.97%，是花气息的主要要素。此外，雌花气息中还主要含有α-金合欢烯(16.61%)、顺乙酸-3-己烯酯(15.97%)以及顺-3-己烯-1-醇(10.92%)等物资；雄花气息中还主要含有顺乙酸-3-己烯酯(11.23%)、苯甲醚 (10.79%)以及β-榄香烯 (9.98%)等物资。

在检测到的17中蒸发物中，雌花和雄花各自所独到的蒸发物仅3种，雌花：1-己醛、乙酸己酯忍让-异戊酸-3-己烯酯；雄花：顺-β-罗勒烯、β-榄香烯和香树烯。两者共同含有的多达12种。因此，雄花和雌花气息化合物的构成模式基本相似。

国产视频偷拍自拍在线 2.2 花气息的化合物类别

小果叶下珠花气息中共包含3种类型的化合物，包括脂肪酸繁衍物、萜类(单萜类和倍半萜类)和芳醇族化合物。从图 2不错看出：雌花和雄花中，均主要以萜类和脂肪族化合物为主；两大类蒸发物相对含量高达：87.81%和75.1%。此外，芳醇族化合物在两种花气息中含量均最少。

2.3 花气息蒸发物的开释量

用内标法分别对小果叶下珠雌花和雄花气息中各个组分进行定量，得回单元时辰内单朵花蒸发物的总蒸发量，如图 3所示。雌花的蒸发量高达(81.11±22.66)pg/h；而雄花仅为(20.68±3.10)pg/h，雌花的开释量显耀高于雄花(t=5.21，P<0.005)。成果标明小果叶下珠雌花和雄花气息存在昭彰的量上的互异。

2.4 雌花和雄花气息互异性分析

对小果叶下珠花气息顶空样品(雄花4；雌花5)中17种化合物进行主要素分析，其成果如图 4 所示。主要素1和2的累计方差累计孝顺率达到 64％，可以为这两主要素包含了小果叶下珠花气息中主要信息。小果叶下珠雄花和雌花气息顶空样品各自团员在通盘，两者之间相互分离，莫得交叉或重复。对两个主要素进行非参数Krushal-Wallis 锤真金不怕火，成果表露，用主要素1和2如实不错将雄花和雌花的气息昭彰隔离开 (χ2=6，P =0.014)，以上成果诠释小果叶下珠雄花和雌花的气息化学要素存在昭彰的互异，即具两性异型性。

3 扣问 3.1 小果叶下珠花气息特异性信号止境构成特征

花气息是由植物花瓣及腺体开释的一类具有香气的蒸发性物资，四肢一种陈腐绪言，在植物与虫豸的相互关系中至关不毛[22]。比如，传粉虫豸可通过识别植物气息来寻找“特异”植株[23]。本继续从小果叶下珠花气息均分离出17种蒸发物。其中，顺-β-罗勒烯在雌花和雄花中含量均最高，是主要要素(表 1)。与头细蛾传粉联系的大戟科植物种类粘稠[4， 24]，但当今已武断出花气息化学要素的仅2科6陶冶物[25-26]。已有继续表露，小叶黑面神(Breynia vitis-idaea)花气息主要物资是2-苯乙腈和2-苯酒精；香港算盘子(Glochidion. zeylanicum)中主要含有反-β-罗勒烯，而披针叶算盘子(G. lanceolatum)中以芳樟醇为主，台闽算盘子(G. rubrum)，倒卵叶算盘子(G. obovatum)以及里白算盘子(G. acuminatum)主要为顺-β-罗勒烯和有芳樟醇[25-26]。除顺-β-罗勒烯外，以上4种主要气息物资均在小果叶下珠花中莫得检测到。此外，在武断的17种化合物中，多达9种物资为小果下珠独到，在以上6陶冶物花中均无发现。因此，尽管到当今为止报谈花气息的植物数目有限，但通过以上对比发现，小果叶下珠花气息与已报谈的6种同科植物花气息化学构成之间存在着一定的互异，具有种特异性。然则，还需进一步开展触角电生理分析和虫豸行径学执行来武断特异性眩惑小果叶下珠传粉头细蛾的活性物资。

Visser 提倡，植物蒸发物都频繁以两种格式好意思满其特异性：(1)依靠一些常见的化合物，通过不同种类，依照不同比例羼杂变成，即称为“泛化”政策。(2)依赖一种或者某几种关心化合物好意思满特异性，即称为“特化”政策[27]。Knudsen等归纳转头了利用顶空动态法辘集的38目90科991物种，共发现1700 多种花香化合物[28]。Tomoko等继续标明，5种算盘子植物花气息中42种化合物，高达30种存在其他吐花植物中[25， 28]。Svensson等继续表露，眩惑小叶黑面头细蛾的主要物资2-苯酒精和2-苯乙腈也分别平凡存在于263种和68陶冶物中[26， 28]。因此，已报谈花气息的与传粉头细蛾联系的大戟科植物均选用了“泛化”政策好意思满其气息特异性，来眩惑各自的传粉者。然则，到当今为止，鸡嗉子榕(Ficus semicorda)是植物与虫豸专性传粉互利共生体系中惟一种通过关心化合物4-苯甲基醚，通过设立“好意思妙通谈”眩惑其种特异性传粉者Ceratosolen gravelyi为其进行传粉的植物[29]。在小果叶下珠花气息中共分离出17中化合物(表 1)，牝牡气息花的主要物资顺-β-罗勒烯不但存在于同科植物算盘子属植物和黑面神中[26-27]，而且还平凡存在于其他43科的植物花中[25]。另外，其它蒸发物也存在于其他植物中[25]。因此，以为小果叶下珠花气息主淌若利用一些常见化合物，通过一定的比例羼杂变成其特异性“化学指纹图谱”，来区别同科其他植物，介导传粉头细蛾找到宿主，这么就守护了小果叶下珠和传粉头细蛾之间专性传粉互利共生关系的高度种特异性。

3.2 小果叶下珠花气息两性异型性

在一般的动物-植物(牝牡异花)传粉系统中，植物雌花和雄花开释的气息频繁相似，主淌若由于它俩均眩惑兼并传粉者。为确保传粉者捎带花粉在雌花和雄花之间的到手完成漂流，成功为植物授粉，植物会取舍进化出相似的雌花与雄花气息信号[17-19]。此外，当植物花一方(频繁为雄花)可为传粉者提供答谢(取食花粉)或者生息形貌，而另一方(频繁为雌花)则不提供任何答谢。此时，无答谢方雌花频繁会化学模拟开释与雄花相似的气息，来糊弄指点传粉者为其授粉[30]。两性间气息化学模拟阵势在榕树[19， 28， 31-32]和苏铁科植物[33-35]中宽泛存在。然则，本继续发现，小果叶下珠雌花与雄花间气息存在着昭彰互异，即花气息具有两性异型性(图 4)。相同，由头细蛾专性传粉的小叶黑面神雌花与雄花之间气息化学要素也存在不对[27]。就牝牡异花的小果叶下珠而言，雌花和雄花在形态结构上存在昭彰的互异(图 1)，两性间花形态结构的这种互异可能会导致雌花与雄花产生的气息不均一[29]。然则，Svensson等[27]提倡一种符合性假定：传粉头细蛾在宿主小叶黑面神雌花和雄花上施展出昭彰不同且高度要领化的传粉行径：先在雄花采粉；然后为雌花传粉并在其内产卵。忖度宿主植物为了符合传粉头细蛾这种如斯高度特异的传粉行径，可能会取舍进化产生不同的花香，分别眩惑头细蛾完成极其不同的传粉行径。头细蛾在小果叶下珠和黑面神上的所施展出相似的传粉行径[10-11]。因此，本文也营救以上符合性假定，以为小果叶下珠雌花和雄花气息存在两性异型性很可能是为符合头细蛾这种高度特异的传粉行径所致。然则，还需要进一步对非细蛾传粉的大戟科植物花气息两异型性分析以及联系头细蛾行径学等执行关于此假定加以考据。

此外，大大都虫豸为植物传粉同期，主淌若为了从中寻求一定的答谢。植物雌花和雄花所提供的答谢不同可促使花信号两性异型性的产生[20]。传粉头细蛾在小果叶下珠雄花上不错取食花粉四肢食品答谢，然则，雌花不错为其提供产卵形貌，可供自后代发育。因此，小果叶下珠雄花和雌花为头细蛾提供的答谢不同，导致其花气息产生两性异型性。

3.3 小果叶下珠花气息开释量的互异

本执行成果表露，单元时辰内，小果叶下珠单朵雌花开释量显耀高于雄花(图 3)。通过原野不雅测，小果叶下珠雌花尺寸昭彰大于雄花，忖度牝牡间花朵尺寸大小的互异是可能导致小果叶下珠雌花气息开释量高于雄花的原因之一[30]。然则，Waelti等继续表露，在白玉草(Silene latifolia)-夜蛾(Hadena bicruris)育幼传粉系统中，白玉草雄花虽小，但开释的气息昭彰高于雌花，导致传粉夜蛾更偏好取舍雄花，雄花不错眩惑更多的传粉者[36]。因此，还需要对小果叶下珠花气息眩惑传粉头细蛾生物学行径学执行来进一步分析导致小果叶下珠花气息开释量的互异的原因。

4 论断

遴荐动态顶空吸附法辘集小果叶下珠花气息，期骗GC-MS分析武断其化学要素，并利用主要素分析法比拟雄花和雌花气息之间的互异：

(1) 小果叶下珠花气息中共武断17种蒸发物，以萜类和脂肪族物资为主，雌花与雄花主要要素均为顺-β-罗勒烯，这些化合物变成眩惑小果叶下珠头细蛾特异性的化学信号，与已报谈的6种头细蛾联系植物的花气息之间存在昭彰的互异，这么守护了小果叶下珠与头细蛾专性传粉互利共生关系的高度种特异性。

(2) 小果叶下珠花气息具有两性异型性，雌花和雄花开释不同的气息，忖度是为了符合头细蛾在宿主上的高度特异的传粉行径进化而产生，确保头细蛾先在雄花上采粉，然后漂流至在雌花上传粉并产卵，从而保证了两者之间专性互利关系的牢固性。

继续标明：小果叶下珠花气息止境两性异型性对守护其与传粉头细蛾专性传粉互利共生体系具有不毛的化学生态学酷爱国产 成人 在线。

致谢: 西南林业大学李宗波敦朴对执行予以匡助，中国林业科学继续院热带林业继续中心梢平林场使命主谈主员对原野辘集使命提供营救，特此致谢。

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